Главная/КЛЕТОЧНЫЕ КУЛЬТУРЫ Информационный бюллетень. Выпуск 25 (2010)

КЛЕТОЧНЫЕ КУЛЬТУРЫ Информационный бюллетень. Выпуск 25 (2010)

УДК 576.3, 576.4, 576.5, М 54
Клеточные культуры. Информационный бюллетень. Выпуск 25.
Отв. ред. М.С. Богданова. — СПб: Изд-во Политехн. ун-та, 2010. — 79 с.
ISSN 2077-6055

| Вып. 26 | 2010 | 1-79 | pdf |

ОСНОВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ НА КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУРАХ В УЧРЕЖДЕНИЯХ РОССИИ

РОЛЬ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ БЕЛКОВ ВНЕКЛЕТОЧНОГО МАТРИКСА В КАРИОТИПИЧЕСКОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ «БЕЗМАРКЕРНЫХ» КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ
Г.Г. Полянская
Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург; poljansk@mail.cytspb.rssi.ru

Показано существенное влияние иммобилизованных белков внеклеточного матрикса (ВКМ) — ламинина и фибронетина, на характер кариотипической изменчивости в «безмаркерных» клеточных линиях разного происхождения (эпителиоподобные и фибробластоподобные). Установлено, что характер количественной кариотипической изменчивости не зависит, а характер структурной изменчивости зависит от происхождения линии. Показано также, что конкретная структура кариотипа вносит определенные коррективы в характер кариотипической изменчивости, обеспечивая способ адаптации клеточной культуры к определенному субстрату. Полученные результаты существенно расширили представления о важности иммобилизованных белков ВКМ для жизнедеятельности клеток, ибо изменения кариотипической структуры неразрывно связаны с нарушением функционирования генов, что может привести к изменению разных клеточных свойств.
Ключевые слова: кариотипическая изменчивость, клеточная линия, белки внеклеточного матрикса, ламинин, фибронектин, структурный вариант кариотипа, хромосомные аберрации
| Вып. 25 | 2010 | 3-14 | pdf |

ПРОДУКЦИЯ IgM И J ЦЕПИ B-ЛИМФОБЛАСТОИДНЫМИ КЛЕТОЧНЫМИ ЛИНИЯМИ
М.П. Самойлович, А.А. Пиневич, Н.Л. Вартанян, В.Б. Климович
Российский научный центр радиологии и хирургических технологий, Санкт-Петербург; mpsamoylovich@gmail.com

Характерной чертой B-лимфобластоидных клеточных линий является продукция связанных с мембраной или секретируемых иммуноглобулинов (Ig). Многие линии секретируют молекулы IgM, в состав которых обычно входит полипептид — J цепь. В клетках J цепь участвует в сборке пентамерных молекул IgM, при отсутствии или недостаточной экспрессии J цепи клетки синтезируют гексамеры. Гексамерные молекулы IgM, в отличие от пентамерных, не способны связываться с рецептором полимерных иммуноглобулинов (pIgR) эпителиальных клеток и формировать секреторный IgM. Обнаружение J цепи в цитоплазме или в среде культивирования позволяет судить о том, какой из вариантов полимерных молекул IgM синтезируют клетки. Задача работы состояла в изучении продукции IgM и J цепи клетками линий Namalva, NC-37, RPMI 1788 и Raji, представленных в Российской коллекции клеточных культур позвоночных. В исследовании использованы методы иммуноферментного анализа (ИФА) и проточной цитофлуориметрии, разработанные на основе созданных в лаборатории моноклональных антител против мю-цепей и против J цепи. В культурах линии RPMI 1788 обнаружена широкая вариабельность содержания внутриклеточного IgM, при этом менее одной трети клеток экспрессирует J цепь. В среде культивирования линии RPMI 1788 выявлена высокая концентрация IgM, большая часть которого не имеет J цепи. Клеточные популяции Namalva и NC-37 однородны по содержанию как IgM, так и J цепи. Для этих линий характерен низкий уровень секреции IgM. В среде культивирования клеток Namalva и NC-37 доминируют молекулы IgM, содержащие J цепь. Клетки линии Raji экспрессируют J цепь, но не секретируют IgM в среду культивирования. Полученные данные позволяют заключить, что линии Namalva и NC-37 синтезируют пентамеры IgM, а линия RPMI 1788 гетерогенна и является продуцентом преимущественно гексамерной формы IgM.
Ключевые слова: IgM, J цепь, Namalva, NC-37, RPMI 1788, Raji
| Вып. 25 | 2010 | 15-24 | pdf |

ПОЛУЧЕНИЕ, ХАРАКТЕРИСТИКА И ПРИМЕНЕНИЕ ПОСТОЯННОЙ КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ ICO ЯИЧНИКОВ НЕПОЛОВОЗРЕЛОГО КАРПА, CYPRINUS CARPIO
Т.И. Щелкунова, И.С. Щелкунов
Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии, г. Покров, Владимирская обл.; shchelkun@yahoo.com

Приводятся данные о получении, морфологической и кариологической характеристиках, параметрах культивирования, видовой принадлежности, использовании для выявления вируснейтрализующих антител у рыб и спектра чувствительности к ихтиовирусам постоянной линии клеток ICO яичников неполовозрелого карпа.
Ключевые слова: постоянная линия клеток, карп, характеристика
| Вып. 25 | 2010 | 24-36 | pdf |

СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ: ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В ФУНДАМЕНТАЛЬНОЙ КЛЕТОЧНОЙ БИОЛОГИИ И МЕДИЦИНЕ
ВЛИЯНИЕ КОМПОНЕНТОВ ВНЕКЛЕТОЧНОГО МАТРИКСА НА КЛОНАЛЬНЫЙ РОСТ И ОСТЕОГЕННУЮ ДИФФЕРЕНЦИРОВКУ МЕЗЕНХИМНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК КРЫСЫ
О.Н. Хныкова, О.В. Паюшина, Н.Н. Буторина, Э.И. Буеверова, В.И. Старостин
Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, Москва; payushina@mail.ru

Белки внеклеточного матрикса являются необходимым компонентом микроокружения мезенхимных стромальных клеток (МСК). Исследование адгезивных взаимодействий МСК с матриксом необходимо для понимания механизмов регуляции пролиферации и дифференцировки МСК и важно для дальнейшего развития клеточной терапии. Целью этого исследования был анализ влияния некоторых белков внеклеточного матрикса (коллаген I типа, фибронектин и ламинин) на клональный рост и остеогенные потенции МСК, полученных из костного мозга половозрелых крыс и печени зародышей крыс. Было обнаружено, что для обоих источников доля колониеобразующих единиц фибробластов (КОЕ-Ф), прикрепившихся за первые 7 дней инкубации, существенно выше на фибронектиновом и коллагеновом покрытии по сравнению с обычным пластиковым покрытием. Влияние ламинина на адгезию КОЕ-Ф выражено в меньшей степени. Анализ экспрессии щелочной фосфатазы, маркирующей ранние стадии остеогенной дифференцировки, указывает на сниженный остеогенный потенциал костномозговых КОЕ-Ф на фибронектине по сравнению с пластиком, коллагеном I типа и ламинином. Доля остеогенных клеток среди КОЕ-Ф зародышевой печени крайне низка независимо от присутствия белков внеклеточного матрикса. Анализ терминальной дифференцировки костномозговых МСК в остеогенной среде показал подавляющий эффект фибронектина на отложение кальция в остеогенных узелках. Коллаген I типа и ламинин существенного эффекта на остеогенную дифференцировку в данной экспериментальной системе не оказывали. Изучение молекулярных механизмов обнаруженных явлений представляется перспективной темой для дальнейших исследований.
Ключевые слова: мезенхимные стромальные клетки, колониеобразующие единицы фибробластов, остеогенез, адгезия, белки внеклеточного матрикса, коллаген I типа, ламинин, фибронектин
| Вып. 25 | 2010 | 37-47 | pdf |

HLA-АНТИГЕННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НАТИВНЫХ И КУЛЬТИВИРУЕМЫХ НЕЙРОКЛЕТОК ФЕТАЛЬНОГО И ПОСТНАТАЛЬНОГО ГОЛОВНОГО МОЗГА ЧЕЛОВЕКА
Л.Д. Любич, Н.И. Лисяный, В.М. Семенова, Л.П. Стайно
ГУ «Институт нейрохирургии им. акад. А.П. Ромоданова АМН Украины», Киев; Liubichld@mail.ru

Целью исследования было изучение экспрессии антигенов главного комплекса гистосовместимости (major histocompatibility complex — MHC или human leucocyte antigens — HLA) нативными и культивируемыми нейроклетками (НК) головного мозга человека разного срока гестации (англ. gestation — период беременности) и различной степени дифференциации на протеиновом уровне и на уровне мРНК с помощью методов иммунофенотипирования и RT-PCR. От уровня экспрессии антигенов HLA на трансплантированных НК зависит способность иммунокомпетентных клеток реципиента распознавать клетки трансплантата и индукцировать специфический ответ, приводящий либо к приживлению, либо к отторжению трансплантата. Установлено, что доля HLA-A,B,C- и HLA-DR-экспрессирующих клеток была наименьшей среди нейроклеток человека 5-й недели гестации, постепенно возрастая к 8-9-й неделе гестации. Экспрессия исследованных аллелей мРНК HLA-A1, и особенно, HLA-DRa1, возрастает от полного отсутствия или незначительных количеств у НК человека 5-9-й недели гестации (нейральных стволовых клеток — НСК и нейральных прогениторных клеток — НПК) до частичной экспрессии у регионарных НСК зрелого мозга (клеток ольфакторной луковицы) и до значительной экспрессии в клетках белого вещества, и, особенно, серого вещества зрелого мозга. В процессе культивирования НК человека 5-9 недели гестации в среде DMEM+ретинола ацетат происходит снижение количества и доли клеток, экспрессирующих антигены HLA І и ІІ класса как на протеиновом уровне, так и на уровне мРНК, тогда как присутствие в среде факторов роста FGF и EGF способствует сохранению (FGF) или нарастанию (EGF) количества таких клеток. При культивировании в DMEM количество клеток ольфакторной луковицы, экспрессирующих антигены гистосовместимости І и ІІ класса, снижается с 10-х по 20-е сутки.
Ключевые слова: нейроклетки, ольфакторная луковица, белое и серое вещество головного мозга, антигены HLA, иммунофенотипирование, экспрессия мРНК
| Вып. 25 | 2010 | 47-59 | pdf |

КЛЕТОЧНАЯ БИОТЕХНОЛОГИЯ И ТКАНЕВАЯ ИНЖЕНЕРИЯ
БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ГИСТОНОВ И ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В БИОТЕХНОЛОГИИ
О.А. Горюхина,^{1 *} Г.П. Пинаев ²
¹ Кафедра биохимии Санкт-Петербургского государственного университета, ² Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург; ^* pushkeen@gmail.com

В настоящем кратком обзоре суммированы данные литературы и собственные данные о действии внеклеточных гистонов на функции различных типов клеток. Рассмотрены перспективы создания транспортных систем на основе гистонов для целенаправленной доставки лекарственных средств, которые самостоятельно не проходят через клеточные мембраны и тканевые барьеры. Исследована возможность использования гистонов, иммобилизованных на микросферах, для модификации поверхностей, предназначенных для культивирования клеток. Показано, что гистоны, иммобилизованные на микросферах и нанесенные на поверхность культуральных сосудов, способствуют адгезии культивируемых клеток разного происхождения, их пролиферации и формированию сети клеточных структур за счет образования межклеточных контактов и одновременного взаимодействия клеток с несколькими микросферами. Рассматривается возможность использования подобных микросфер в качестве компонентов при создании трехмерных пористых матриц, предназначенных для формирования в них тканеподобных клеточных структур in vitro.
Ключевые слова: внеклеточные гистоны, конъюгаты лекарственных средств с белками-носителями, микросферы, адгезия, пролиферация культивируемых клеток
| Вып. 25 | 2010 | 59-70 | pdf |

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
АДАПТАЦИЯ КЛЕТОК МDСК К РОСТУ В МАЛО- И БЕССЫВОРОТОЧНОЙ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ
Р.Я. Подчерняева,¹ Г.А. Данлыбаева,¹ Н.А. Мазуркова,² О.В. Бакланова,¹ В.В. Честков,³ В.Ю. Табаков
¹ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, Москва, ² ГНЦ вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, пос. Кольцово, Новосибирск обл., ³ ГУ Медико-генетический научный центр РАМН, Москва

После 5 пассажей в малосывороточной рисовой среде были получены адаптированные к росту в этой среде клетки линии МДСК. У этих клеток наблюдалась более низкая пролиферативная активность и изменение морфологии по сравнению с контролем. При этом сохранялась жизнеспособность клеток и активность репродукции вируса гриппа А (H1N1 и Н3N2). Для адаптации клеток МДСК к полностью бессывороточной среде «Гибрис-2» потребовалось 17 серийных пассажей. У адаптированных клеток также наблюдалась пониженная пролиферативная активность и изменение морфологии. Репродукция вирусов гриппа А (H1N1 и Н3N2) была ниже на 0,5 lgТЦД50 по сравнению с контролем, но вирус гриппа В активно размножался в адаптированных и контрольных клетках. Следовательно, как рисовая среда, так и среда «Гибрис-2» пригодны для культивирования клеток линии МДСК и могут применяться для репродукции вирусов гриппа.
Ключевые слова: клетки, адаптация, рисовая среда, бессывороточная среда, репродукция вирусов гриппа
| Вып. 25 | 2010 | 70-74 | pdf |

Х Р О Н И К А

КОНФЕРЕНЦИИ И ШКОЛЫ, ПРОВЕДЕННЫЕ В 2009 ГОДУ

1. Традиционный симпозиум по биологии клетки в культуре на тему «Культивируемые клетки как основа клеточных технологий» был проведен в Санкт-Петербурге в Институте цитологии РАН в октябре 2009 года. Помимо устных докладов и стендовых сообщений в рамках симпозиума прошло общее собрание членов Ассоциации специалистов по клеточным культурам. Кроме того, в рамках симпозиума состоялась демонстрация новых конфокальных микроскопов, производимых фирмой Olimpus и компанией Karl Zeis.
В целом, все представленные на симпозиуме доклады продемонстрировали развитие в нашей стране последовательных этапов единой цепи создания наукоемких инновационных биомедицинских клеточных технологий, начиная от фундаментальных исследований и разработок клеточных продуктов до их практического применения в медицинской практике.

2. В декабре 2009 года в Научном центре РАН в Санкт-Петербурге состоялась Международная конференция «Инновационный потенциал фундаментальных наук и проблемы его реализации». На конференции с докладом на тему «Создание клеточных технологий и их применение» выступил президент АСК, д.б.н., проф. Г.П. Пинаев.

3. В марте 2010 года в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН в Москве состоялись Практические курсы по культивированию клеток. В программу курсов были включены следующие темы: культивирование перевиваемых клеточных линий человека и животных; чувствительность клеточных линий к различным родам вирусов; определение контаминаций клеток микоплазмой и др.

КОНФЕРЕНЦИИ 2010

21-22 апреля 2010 г. в Санкт-Петербургском государственном медицинском университете состоится 4-й Всероссийский симпозиум с международным участием «Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии». Будут обсуждаться следующие проблемы: организация и деятельность тканевых и клеточных банков России, вопросы разработки и технологии изготовления биологических материалов, тканевая инженерия, клеточные технологии и их клинические аспекты.
5-7 октября 2010 г. в Санкт-Петербурге в Институте цитологии РАН состоится «16-й Всероссийский симпозиум «Структура и функции клеточного ядра«. На симпозиуме предполагается обсудить следующие вопросы: структура хромосом, пространственная динамика в ядре, трехмерная организация и динамика хроматина, репарация и репликация ДНК и др. Контактные телефоны Оргкомитета: (812) 297-18-59, 297-18-29.

Р А З Н О Е

Вышла из печати книга: «Животная клетка в культуре» (Методы и применение в биотехнологии) под общ. ред. д.б.н., проф. Дьяконова Л.П., М.: издательство «Спутник», 2009, 656 с. — издание второе, дополненное.

ИНФОРМАЦИЯ АССОЦИАЦИИ СПЕЦИАЛИСТОВ ПО КЛЕТОЧНЫМ КУЛЬТУРАМ

РЕШЕНИЯ СОВЕЩАНИЯ ЧЛЕНОВ АССОЦИАЦИИ СПЕЦИАЛИСТОВ ПО КЛЕТОЧНЫМ КУЛЬТУРАМ 13 ОКТЯБРЯ 2009 Г.

13 октября 2009 г. в Институте цитологии РАН (Санкт-Петербург) состоялось очередное совещание членов Ассоциации специалистов по клеточным культурам (АСКК), принимавших участие в проведении симпозиума «Культивируемые клетки как основа клеточных технологий». После обсуждения ряда проблем, касающихся научной и практической деятельности членов АСКК, были приняты следующие решения:

1. Установить размеры ежегодных членских взносов с 2010 года:
— для членов АСКК — 150 рублей (для студентов и аспирантов — 50 рублей),
— для членов Российского отделения Европейского общества тканевых культур (ЕОТК) — 20 долларов.
2. Просить всех членов АСКК и ЕОТК своевременно оплачивать ежегодные членские взносы, которые принимает казначей АСКК Алла Ивановна Гусева.
Взносы можно пересылать почтовыми переводами по адресу:
194064 Санкт-Петербург, Тихорецкий пр., 4. Институт цитологии РАН. Ассоциация специалистов по клеточным культурам. А.И. Гусевой.
Тел.: (812) 297-39-83; 8-921-984-69-72. E-mail: msb@mail.cytspb.rssi.ru
3. Просить всех членов АСКК активно участвовать в создании очередных выпусков Информационного бюллетеня «Клеточные культуры» — присылать в редакцию бюллетеня небольшие сообщения (не более 10 стр.) о результатах своих фундаментальных и прикладных исследований на клеточных культурах, о научных конференциях, о новых методах исследования, о новых реагентах и т.д.
4. Правила для авторов представлены в конце каждого выпуска бюллетеня. Их можно также найти на сайте Института цитологии РАН (СПб) на странице Информационного бюллетеня «Клеточные культуры».
5. Просить всех членов АСКК в случае изменения реквизитов (служебных и домашних адресов, телефонов, электронной почты) своевременно сообщать об этом секретарю АСКК М.С. Богдановой.
Проводить совместно с Институтом цитологии РАН в Санкт-Петербурге 1 раз в 3 года Школы по методам культивирования клеток для молодых ученых.
Подготовить программу и наметить сроки проведения Практических курсов по методам культивирования клеток, которые предложено проводить на базах разных институтов, занимающихся исследованиями на клеточных культурах.
Просить Министерство науки и образования учредить целевые гранты для проведения совместных научных исследований на клеточных культурах с сотрудниками учреждений из стран СНГ.

В декабре 2009 года редакция Информационного бюллетеня «Клеточные культуры» оформила документы, необходимые для присвоения бюллетеню Международного стандартного серийного номера (ISSN). Запрос на присвоение бюллетеню этого номера и оформленные документы были высланы в Париж в Международный центр ISSN, где Инф. бюлл. «Клеточные культуры» был зарегистрирован под номером ISSN 2077-6055, Key title: Kletocnye kul’tury.

С 2010 г. редакция бюллетеня будет помещать на сайте Института цитологии РАН полную электронную версию всех последующих выпусков бюллетеня, а также резюме и ключевые слова опубликованных в них статей на английском языке.

НОВЫЕ ПРАВИЛА ДЛЯ АВТОРОВ

Статьи принимаются редакцией в электронном варианте и в рукописи. Электронный вариант статьи высылается в редакцию по электронной почте в виде отдельного файла (вместе с рисунками и таблицами) в формате Microsoft Word для Windows. При создании файла необходимо соблюдать следующие требования:

параметры страницы: поля: верхнее — 2,5 см, нижнее, правое и левое — по 2,1 см;
от края колонтитула: верхнего — 1,8 см, нижнего — 1,25 см; размер бумаги: » А4″;
формат: шрифт — Arial Narrow, обычный, размер 13; выравнивание — по ширине;
междустрочный интервал — полуторный, красная строка — отступ на 0,5 см.

Размер рукописи статьи не должен превышать 10 машинописных страниц. В редакцию бюллетеня высылается 2 экземпляра рукописи статьи и направление ее в бюллетень от учреждения, в котором выполнена работа. На английском языке представляются: название статьи, ф. и. о. авторов, наименования учреждений, краткое резюме и ключевые слова.

Адрес редакции:

194064 Санкт-Петербург, Тихорецкий пр., 4. Институт цитологии РАН.
Отв. редактору Инф. бюлл. «Клеточные культуры» М.С. Богдановой
Тел.: (812) 297-53-10, 8-911-284-28-64; факс: (812) 297-03-41, 297-42-96
Электронный адрес: msb2051@rambler.ru

Перед основным текстом статьи приводится краткое резюме и ключевые слова. Резюме (без слова «Резюме») должно быть не более 1 стр. Статья состоит из следующих разделов: вводная часть, материал и методы, результаты, обсуждение и список литературы. Теоретические и обзорные статьи могут иметь произвольную структуру, но обязательно должны содержать резюме и ключевые слова.

В ссылках на литературу в тексте статьи указываются в круглых скобках номера работ в порядке их цитирования. В конце статьи приводится список литературы, который должен содержать библиографическое описание всех работ, ссылки на которые имеются в тексте статьи. Необходимо выделять жирным шрифтом фамилии и инициалы всех авторов цитируемой публикации. Для книг указываются фамилии и инициалы авторов, год издания, название книги, место издания, издательство и общее число страниц.

Все присланные в редакцию статьи проходят рецензирование и только после получения положительных рецензий публикуются.